Учебная работа по дисциплине Животноводство и зоотехника

Реферат Определение уровня естественной резистентности и оценке иммунного статуса рыб



Текст реферата Определение уровня естественной резистентности и оценке иммунного статуса рыб

Страница: 2 из 20

фагоцитарной реакции лейкоцитов
по НСТтесту более трудоемкий, чем основанный на использовании
тестмикроорганизмов. Изучение фагоцитарной активности лейкоцитов в
отношении
микробов в практике лабораторных исследований чаще всего проводится
in vitro и
in vivo. В качестве тестмикробов рекомендуется использовать
грамположителъные и грамотрицательные микробы: staphilococcus aureus,

acromonas hydrophila и saccharomyces cerevisiae.
2.1.2.1. Метод определения фагоцитарной активности лейкоцитов in
vitro по

Е.А. Коста и М.И. Стенко (1947).
Принцип метода. Указанный метод основан на учете соотношения числа
лейкоцитов, участвующих в фагоцитозе, и общего числа клеток белой
крови.
Оборудование и реактивы: пробирки стерильные; пипетки стерильные на
1,0 мл; пастеровские пипетки стерильные; 0,65%-ный стерильный раствор
натрия
хлорида; 2%-ный стерильный раствор натрия цитрата; водяная баня,
отрегулированная на 60°С; объект фагоцитоза -одномиллиардная взвесь
суточной
культуры бактерий a. hydrophila, инактивированных при 60°С в течение
30 минут,
приготовленная на 0,65%-ном стерильном растворе натрия хлорида;
термостат
отрегулированный на 26°С; предметные стекла; шли4юваннос стекло;
набор для
окраски мазков крови; метиловый спирт или смесь этилового спирта с
эфиром ]: 1;
рабочий раствор красителя азурэозина; иммерсионное масло;
микроскоп.
Материал для исследования, ход определения и учет результатов. В
пробирку вносят 0,1 мл 2%-ного стерильного раствора натрия цитрата,
(,|,2 мл
свсжевзятой крови от обследуемой рыбы, 0,2 мл объекта фагоцитоза.
Взвесь
осторожно, но тщательно перемешивают и помещают в термостат при
температуре
26°С (для теплолюбивых рыб) и более низкой (для холодолюбивых). Через
15 и 30
минут, 1; 1,5 и 2 часа с момента термостатирования пастеровской
пипеткой
забирают смесь из пробирки, помещают на предметное стекло и делают
мазки,
которые фиксируют в течение 10 мин. смесью спирта с эфиром (1:1) или
в течение
5 мин. метиловым спиртом. Затем мазки красят в течение 20-40 мин.
рабочим раствором азурэозина. После этого их просматривают под
иммерсией (ок.7.x об.90).
Подсчитывают 100 (иногда 50) лейкоцитов. Захватывающую способность
лейкоцитов выражают двумя показателями: процентом фагоцитоза
процентным
отношением лейкоцитов, захвативших тестмикробы, к общему числу
подсчитанных, и фагоцитарным индексом количеством тестмикробов,
захваченных одним фагоцитирующим лейкоцитом.
2.1.2.2. Метод определения фагоцитарной активности лейкоцитов in
vivo по

Г.Д.Гончарову (1966)
Принцип метода заключается в исследовании реакции фагоцитоза
лейкоцитов в брюшной полости рыб. Анализ фагоцитарной реакции,
проводится
через 15, 30, 60, 90 и 120 мин, с момента введения микроорганизмов
Оборудование и реактивы: шприц и инъекционные иглы; 0.65%-ный
стерильный раствор натрия хлорида; водяная баня, отрегулированная на
60°С;
одномиллиардная взвесь суточной культуры бактерий А. hydrophila,

Страницы: 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20